EHP（Enterocytozoon hepatopenaei），是一种感染真核生物的细胞内寄生虫，如果感染对虾，那么可以引起对虾的生长迟缓的相关疾病。

一、EHP在对虾养殖当中，危害极大

它们是一种寄生虫，会破坏肝胰管内的上皮细胞，阻碍虾对营养物质的吸收，EHP感染对虾典型的病征是生长缓慢、发育迟缓、外壳软、大便呈白色状。据报道，在印度、泰国和中国等亚洲国家，EHP导致虾年产量减少10%-20%，造成重大经济损失。并且根据记载，EHP于2009年在泰国的斑节对虾当中首次报道。

由于对虾感染EHP，没有任何症状或任何特定的临床症状。因此，诊断测试被认为是最有效的甄别方法。比如：有许多方法，可以通过常规PCR、qPCR（实时荧光定量PCR）或LAMP（环介导等温扩增反应）检测虾疾病中的EHP。

所有上述测试，都是一种从病虾样本中扩增DNA的通用技术，该技术现在广泛用于鉴定由微生物引起的疾病。然而，这些方法需要较高技术、先进的设备、昂贵的测试成本，以及耗费大量的时间。LAMP法虽然反应仅需45分钟，但仍需要先进的高精度控温机。

二、EHP检测技术的发展。

最近，RPA（重组酶聚合酶扩增）技术本质上是基于重组酶（enzymes recombinase）和聚合酶（合成聚合物链或核酸的酶）的活性，对核酸（包括DNA和RNA）进行扩增，已被应用和评估为在寄生虫和病毒性疾病的诊断研究中具有巨大潜力。

RPA技术的关键在于利用重组酶和SSB分子代替了传统PCR中的扩增步骤（以模板DNA进行的扩增），因此RPA可以在37-42ºC等温扩增（或恒温扩增）和样品鉴定时间仅约5-20分钟。单链结合蛋白 (SSB) 分子由蛋白质分子组成，它使DNA的两个单链在分裂之后不会粘在一起，这样酶就可以工作了。

众所周知，PCR测试的3个阶段，需要有三种温度组成：变性阶段，温度升至94ºC，使DNA双链解开；下一阶段是配对阶段，将温度降低到约55 ºC-65 ºC，以便引物进行额外配对；最后是延伸阶段，此时的温度需要达到72℃，Tag酶才能发挥作用，结合成一条完整的互补链。这个循环根据反应的类型重复大约25-40次。

研究人员已尝试应用RPA技术来检测对虾中的EHP疾病，并在不需要对温度进行控制，简化了该过程。然而，对凝胶上的电化学增益产品的分析只允许在实验室中进行，在实际操作中很难应用，而且灵敏度也受到凝胶成像工具的限制。

三、EHP检测技术技术的最新突破

最近的一项研究，应用荧光信号读取和RT-RPA测定（实时RPA）来检测虾中的EHP疾病。该测试使用SWP基因编码EHP孢子壁蛋白，该基因比SSU rRNA基因在分子上的诊断更高，前期研究结果也证实了该基因对EHP检测的良好特异性。

RT-RPA测试显示出良好的灵敏度，可与嵌套式PCR方法相媲美（该技术的灵敏度度非常高），和比使用凝胶电泳分析的RPA检测要好得多。与使用凝胶电泳分析的RPA测定相比，RT-RPA的灵敏度提高了近60倍。此外，样本的RT-RPA结果与巢式PCR方法100%相似，具有良好的可靠性。

使用荧光探针时，可在15分钟内通过可视化确认结果。小型、电池供电的荧光管扫描仪可用于在原位RT-RPA测试中发出信号。由于对设备和电源的依赖程度低，RT-RPA可以轻松组装到便携、方便的实验室手提箱中。

RPA已应用于诊断病毒病原体，例如：WSSV（虾白斑病毒）、IHHNV（对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒）和 SHIV（虾血细胞虹彩病）。

四、总结

结合荧光探针读数的RT-RPA测试套件，可以快速检测虾的EHP感染。它可以作为一种有效且可靠的原位检测工具，来帮助控制养虾场的EHP感染。

文章来源：养虾

责任编辑：张晓曼

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